НОВОСТИ АССОЦИАЦИЯ ОБРАЗОВАНИЕ НАУКА БИБЛИОТЕКА НОРМАТИВЫ ОБЪЕДИНЕНИЯ ОСНАЩЕНИЕ КАЧЕСТВО
КЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗАТОРА SYSMEX SE-9000
За последние 15-20 лет произошло существенное развитие технологии и аппаратуры для автоматического исследования клеток крови на принципе проточной цитометрии. В развитых странах мира автоматический анализ крови почти полностью заменил ручные и полуавтоматические методы. При автоматизированном счете анализируются тысячи, а иногда и миллионы клеток. Это дает возможность получить новые качественные характеристики- графики распределения клеток по объему, индексы, позволяющие более глубоко характеризовать популяции клеточных элементов крови. Современные гематологические анализаторы, требуя для своей работы минимальное количество крови, позволяют определять десятки показателей. Дифференцирование клеток крови при автоматиаированном счете основано на иных принципах, чем визуальный подсчет. Это не может не сказаться на определенном разночтении результатов анализов, выполненных разными способами. На базе клинико-гематологического отделения КДЛ больницы им. С. П. Боткина проведены клинические испытания гематологического анализатора Sysmex SE-9000, после которых этот прибор был закуплен. Больница им. С. П. Боткина является одной из крупнейших многопрофильных клиник Москвы. Ежедневно в КДЛ выполняется 450-500 клинических анализов крови, из которых приблизительно 15-20% приходится на исследование крови гематологических больных. Sysmex SE-9000, являясь анализатором последнего поколения, проводит исследование крови по 23 параметрам, дает 5 гистограмм (WBC - лейкоциты, ЕО - доаинофилы, BASO - базофи-лы, RBC - эритрощстай, PLT - тромбоциты) и 2 скетограммы (WBC-DIFF - дифференцировка лекоцитов, IMI - дифферен-цировка нейтрофиов). Воазможность работы прибора в автоматическом режиме полностью исключает контакт с кровью больного, чем обеспечивается надежная профилактика гепатита и ВИЧ-инфекции. Работа прибора обеспечивается компьютером, Любые неполадки сразу же отражаются на экране монитора с рекомендацией по их устранению. Правильность и воспроизйводимость полученных результатов регистрируется программой кодтряда качества, представленной в 2-х вариантах: построение контрольных карт (графики Levey- Jennings) по 23 параметрам по коммерческой крови и Delta- контроль (Xm) по усредненным данным всех 23 параметров. Прибор снабжен памятью на 10000 анализов. Повторные исследования у одного и того же пациента легко собираются в «карту динамического наблюдения». Производительность в автоматическом режиме - 120 анализов в час. Работа прибора основана на сочетании метода электрической резистентности (кондуктометрии - DC- метод) и радиочастотного анализа (RF- метод). Метод кондуктометрии основан на подсчете числа и определении характера импульсов, возникающих при прохождении клеток через апертурное отверстие, по обе стороны которого расположены два изолированных друг от друга электрода. Последующая математическая обработка импульсов дает информацию о количестве клеток и их размерах. Для обработки импульсов, полученных от разных частиц, в анализаторах используется система дискриминаторов, определяющих высоту (размер) и ширину (длительность) импульсов. Поскольку после программной настройки системе известны объем пробы и ожидаемый диапазон размеров клеток, счетчик может различить импульсы, вызванные тромбоцитами, эритроцитами, лейкоцитами и частицами загрязнения. Импульсы сортируются и накапливаются в диапазоне размеров, указанных для каждой линии. Для подсчета и дифференцировки лейкоцитов в Sysmex SE-9000 предназначены 4 канала WBC, IMI, Ео, BAZO. Поскольку лейкоциты не могут быть разделены по размерам в их естественном виде, то для подсчета и дифференцировки к взвеси лейкоцитов добавляется лизирующий реагент, который проникает через клеточную мембрану и разжижает цитоплазму. Ядро клетки уменьшается пропорционально плотности и структуре. В результате образуется частица, размер которой соответствует специфическим характеристикам различных типов клеток. Размер таких трансформированных частиц не соответствует размерам при визуальном просмотре их в окрашенном мазке крови. Радиочастотный метод (RF- метод) служит для анализа размеров и плотности ядер клеток. Таким образом, в DC- RF канале происходит дифференцировка лейкоцитов на лимфоциты, моноциты и гранулоциты. Строятся скетограммы распределения. Особенностью и нововведением Sysmex SE-9000 является построение индивидуальных кластерных скетограмм. Что это такое? Прежде чем начать дифференцировку лейкоцитов на гранулоциты, лимфоциты и моноциты, для каждого пациента выводится своеобразный "кластерный фенотий", отражающий особенности морфологии его клеток. Только после этого идет окончательная дифференцировка клеток по группам в соответствии с их размерами и плотностью ядра.
Для выявления и счета аозинофилов и бозппримв система снабжена отдельными детекторными каналами. Работа этих каналов основана на применении специфических лизатов. Так, в эозинофильном канале при добавлении к пробе щелочного эозинофил-специфического лизирующего реагента при 40°-50°С происходит сморщивание всех лейкоцитов и оголение ядер, в то время как дегрануляция эозинофилов остается подавленной в течение определенного периода времени. Идентификация и счет базофилов осуществляется аналогичным образом, только при этом используется кислый базофил-специфический лизирующий реагент, задерживающий дегрануляцию базофилов. Количество нейтрофилов высчитывается посредством исключения числа базофилов и эозинофилов из числа гранулоцитов. Анализатор SE-9000 оснащен специальным каналом (IMI- канал), предназначенным для дифференциальной диагностики молодых форм нейтрофильных гранулоцитов. Для отражения патологических изменений в исследуемых образцах анализатор имеет систему «сигналов тревоги», свидетельствующую об изменениях количественного («нейтропения», «лимфоцитоз» и т.д.) и качественного («левый сдвиг», «бласты» и т. д.) состава крови.
Наблюдения за гематологическими больными в процессе цитостатической терапии позволило устаноиксть широкий диапазон измерений количества лейкоцитов. Он колебался от 0,01х109/л до 250х109/л, при этом соблюдалась высокая степень воспроизводимости (CV=1,5%). Что касяется выявления патологии при дифференцировке лейкоцитов, то Sysmex SE-9000 всегда ее выявляет и выставляет «флаги тревоги», которые не всегда соответствуют тем качественным изменениям состава лейкоцитарной формулы, которые имеются у пациента. Позтому наличие флатрования по составу лейкоцитов является указанием, к обязательному визуальному исследованию мазка крови, что на сегодня является референтным методом. При отсутствии «флагов тревоги» в лейкоцитарной формуле мы при визуальном исследовании ни разу патологии не обнаружили.
Определение концентрации гемоглобина осуществляется фотометрически. Используя многофакторный анализ, прибор позволяет получить корректные результаты определения гемоглобина в пробах с высоким лейкоцитозом.
Подсчет эритроцитов и тромбоцитов производится DC- методом, нововведением Sysmex SE-9000 является наличие "динамической фокусировки" канала, что обеспечивает прохождение потока частиц четко по центру аппертуры и исключает их слипание. Тем самым обеспечивается высокая точность и воспроизводимость (CV? 1%) результатов. Поэтому расчетные показатели красной крови, полученные на Sysmex SE-9000, выявляют патологию эритропоэза на ранних стадиях, и их динамика служит большим подспорьем для клинициста при лечении больных. Основываясь на классическом разделении анемий на нормо-хромные и нормоцитарные, гипохромные и микроцитарные, гиперхромные и макроцитарные, мы проанализировали больных с различными видами анемий по параметрам красной крови. RBC-гистограммы Sysmex SE-9000 для каждого пациента накладываются на фон нормальной гистограммы. Характер изменений, выявленный по параметрам красной крови, отражается «флагами тревоги»; гипохромия, микроцитоз, Fe-дефицит, макроцитоз и т. п.
Тромбоциты. За время нашей работы на приборе диапазон измерений их составил от 1,0*109/л до 2548,0*109/л, CV=2,5%. Анализатор отслеживает как глубокие цитопении, так и сверхвысокие цитозы. Ярким примером этого является следующее наблюдение. Больная А. поступила в приемное отделение больницы с профузным маточным кровотечением. Сделанный срочно анализ крови выявил глубокую тромбоцитопению (1,0*109/л). Больной была начата адекватная терапия непосредственно в приемном отделении и затем в гематологическом отделении, Повторно сделанный через 3 дня анализ крови показал увеличение количества тромбоцитов до 191,0х109/л и наличие глубокой анемии (Hb-50,0 г/л). По параметрам красной крови анемия относилась к группе нормохромных нормоцитарных, что характерно для острой постгеморрагической анемии. Через месяц больная была выписана из стационара с умеренно выраженными признаками железодефицитной анемии. Кроме количественных характеристик, анализатор флагированием отражает такие особенности тромбоцитопоэза, как агрегация, макроцитоз, отклонения в нормальном распределении гистограммы.
Таким образом, анализатор Sysmex SE-9000 в условиях крупного многопрофильного стационара с большим количеством гематологических. больных позвоволил значительно повысить качество лабораторных анализов за счет широкого диапазона измерений параметров крови, высокой точности и воспроизводимости.