Просим Вас разъяснить спорный вопрос в выборе оптимального метода
определения билирубина высоких концентраций в сыворотке крови у
новорожденных детей, в связи с тем, что результаты исследований в
различных лабораториях г. NN, пользующихся разными методиками, не совпадают.
Лаборатория ДГБ 1 г. NN пользуется:
Унифицированной методикой определения билирубина в малом объеме сыворотки крови.
Модификация Т.Б Доброседовой и А.С.Циркиной, применяемая при выявлении гипербилирубинемии
у новорожденных в родильных домах и в детских лечебных учереждениях.
Методика описана в Справочнике по клинической химии В.Г.Голба и В.С.Камышникова, 1982 г.
Лаборатория городской больницы N1 пользуется:
Методикой определения билирубина по щелочному варианту,
которая является единой для определения билирубина для взрослых и детей.
Методика рекомендована главным специалистом нашей области.
Были проведены параллельные определения билирубина у новорожденных детей в
лабораториях ДГБ 1 и гор. больницы N1.
Результаты параллельного обследования:
N
ДГБ N1
ГБ N1
N19
250 мкмоль/л
185 мкмоль/л
N66
154 мкмоль/л
111 мкмоль/л
N67
151 мкмоль/л
111 мкмоль/л
21.10
317 мкмоль/л
281 мкмоль/л
Расхождения в результатах составляют в среднем 50 мкмоль/л.
14 октября 1997 г. Были проведены параллельные исследования билирубина по контрольной сыворотке
HUMATROL P (015) с показателями билирубина 77 – 118 мкмоль/л, со средним значением 97.5 мкмоль/л в 3-х больницах.
Результаты исследований:
ДГБ N1 м-д Йендрашика (микрометод)
ОДБ м-д Йендрашика
ГБ N1 м-д Йендрашика (щелочной вариант)
99.4 мкмоль/л
98.6 мкмоль/л
76.8 мкмоль/л
Наша лаборатория в 1996 г. принимала участие в международном контроле качества
LABQULITY, куда входило и определение билирубина.
Дата
Результат
Среднее значение
Сигма
1.1996
31.0 мкмоль/л
28.7 мкмоль/л
2.3 мкмоль/л
6.1996
48.0 мкмоль/л
55.6 мкмоль/л
3.8 мкмоль/л
7.1996
14.0 мкмоль/л
10.6 мкмоль/л
2.2 мкмоль/л
12.1996
44.0 мкмоль/л
39.0 мкмоль/л
2.9 мкмоль/л
Врачи реанимационного отделения нашей больницы обслуживают все детские лечебные учереждения и роддома
г. NN круглосуточно, биохимические же исследования крови выполняются с 8.00 до 15.00 в лаборатории ГБ,
а с 15.00 до 8.00 – дежурным врачем нашей лаборатории.
Для того чтобы рузультаты определения билирубина, проводимые в 2-х лабораториях, совпадали,
главный специалист г.NN настаивает о переходе на метод определения билирубина по щелочному варианту,
несмотря на то, что для определения билирубина микрометодом необходимо 0.4 мл сыворотки крови,
а для определения билирубина по щелочному варианту – 0.7 мл. Учитывая что наши пациенты - грудные дети,
объем сыворотки, используемый в методике, имеет большое значение.
Нас интересуют следующие вопросы:
1. Можно ли использовать щелочной вариант для определения билирубина у новорожденных детей?
Из приведенных данных и опыта работы видно, что щелочной вариант завышает результаты, почему?
2. Какой метод является оптимальным для определения билирубина у новорожденных детей?
3. Каким образом нам решать спорные вопросы, если определение билирубина не входит
в программу контроля качества города и области, а результаты внутрилабораторного контроля качества,
получаемые в нашей лаборатории при проведении контроля правильности с сывороткой HUMATROL P,
являются близкими к наминальному значению?
Убедительная прозьба ответить на наши вопросы в письменном виде.
Описание методов прилагаются.
Подпись: Заведующая КДЛ ДГБ 1
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИЛИРУБИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
(диазометод по Йендрашику, Клеггорну, Грофу)
Перед работой смешивают 5.0 мл диазореактива (1) и 0.15 мл диазореактива (2).
Реагенты
Общий билирубин
Прямой билирубин
Контрольная проба
Сыворотка
0.50 мл
0.50 мл
0.50 мл
Кофеиновый р-в
1.75 мл
1.75 мл
Физиологический р-р
1.75 мл
0.25 мл
Диазосмесь
0.25 мл
0.25 мл
Прямой билирубин определяем через 10 мин.
Общий билирубин определяем через 20 мин.
Вслучае большой концентрации билирубина сыворотку нужно развести физраствором.
Полученный при этом результат умножают на разведение.
Сыворотка
Физ. р-р
Разведение
0.75 мл
0.75 мл
В 2 раза
0.50 мл
1.00 мл
В 3 раза
Смотрим на КФК-3: кювета 0.5 см
Против раствора сравнения
l= 540 нм
Мефан-8001:
Против раствора сравнения
Светофильтр N5
l=546 нм
МИКРОМЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИЛИРУБИНА СЫВОРОТКИ КРОВИ
(диазометод по Йендрашику, Клеггорну, Грофу в модификации Доброседовой и Циркиной)
РЕАКТИВЫ:
Кофеиновый реактив.
Физиологический р-р
Диазосмесь:
А) Диазореактив 1.
Б) Диазореактив 2.
Перед работой смешивают 5.0 мл диазореактива (1) и 0.15 мл диазореактива (2).
Сыворотку предворительно разводим физраствором.
Сыворотка
Физ. р-р
Общий объем
Разведение
0.375 мл
0.375 мл
0.750 мл
В 2 раза
Реагенты
Общий билирубин
Прямой билирубин
Контрольная проба
Сыворотка развед.
0.25 мл
0.25 мл
0.25 мл
Коф. р-в
2.00 мл
2.00 мл
Физ. р-р
2.00 мл
0.25 мл
Диазосмесь
0.25 мл
0.25 мл
Прямой билирубин определяется через 10 мин.
Общий бмлмрубин определяется через 20 мин.
Полученный результат умножаем на 4, т.к. в пробирку попадает 0.125 мл сыворотки вместо 0.5 мл,
используемой в основной методике (0.125 мл составляют 1/4 от 0.5 мл).
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИЛИРУБИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
(диазометод по Йендрашику в щелочной среде)
РЕАКТИВЫ:
Кофеиновый реактив-
125г кофеина бензойной кислоты и 125г уксуснокислого натрия растворяют на водяной бане в 700 мл воды,
после охлаждения доводят до 1 л.
Физиологический р-р – 0.9% раствора NaCl.
Диазосмесь:
A) Диазореактив 1.
5.0 г сульфаниловой кислоты растворяют в мерной колбе на 1л, добавляют 15 мл HCl
(r= 1.19) и доводят до 1л водой.
B) Диазореактив 2.
0.5 г азотистокислого натрия растворяют в воде до 100 мл. Срок хранения в холодильнике – 2 недели.
Перед работой смешивают 10.0 мл диазореактива 1 и 0.25 мл диазореактива 2. Смесь употребляют в течение 30 мин.
после приготовления.
Щелочная смесь.
100 г гранулированного NaOH и 350г сегнетовой соли (виннокислый K-Na) в 500 мл воды.
После охлаждения раствор доводят до 1л водой.
Раствор стойкий, срок хранения в полиэтиленовой посуде – 6 месяцев.
0.05 % раствор – 4.1 мл концентрированной HCl до 1л водой.
4 % раствор аскорбиновой кислоты.
Реагенты
Общий билирубин
Прямой билирубин
Контрольная проба
Сыворотка
0.25 мл
0.20 мл
0.25 мл
Коф. р-в
1.00 мл
1.00 мл
0.05 % HCl
1.00 мл
Физ. р-р.
0.25 мл
Диазосмесь
0.25 мл
0.25 мл
Добавить через 1 мин.
4% раствор аскорбин к-ты
0.05 мл
Прибавить через 10 мин.
Щелочная смесь
0.50 мл
0.50 мл
0.50 мл
Смотрим на ФЭКе: кювета 0.5 см
Против воды
l = 590 нм